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细胞划痕实验

时间:2021-03-24 13:53:23

实验简介:

细胞划痕是一种操作简单,经济实惠的研究细胞迁移/肿瘤侵袭的体外试验方法。其实验原理是,当细胞长到融合成单层状态时,在融合的单层细胞上人为制造一个空白区域,称为“划痕”。划痕边缘的细胞会逐渐进入空白区域使“划痕”愈合。细胞划痕在一定程度上模拟了体内细胞迁移的过程,是研究细胞迁移的体外试验方法中最简单的方法。

 

实验步骤

1. 先用marker笔在6孔板背后,用直尺比着,均匀得划横线,大约 每隔1cm一道,横穿过孔。每孔至少穿过5条线。  

2. 在空中加入约5×105个细胞,具体数量因细胞不同而不同,掌握为过夜能铺满。

3. 第二天用枪头比着直尺,尽量垂至于背后的横线划痕,枪头要垂直,不能倾斜。

4. 用PBS洗细胞3次,去处划下的细胞,加入无血清培养基。  

5. 放入37度5% CO2培养箱中培养。按0,6,12,24小时取出,拍照 (具体时间依实验需要而定)。

6. 统计方法:使用Image J软件打开图片后,随机划取6至8条水平线,计算细胞间距离的均值。

7. 数据处理:每个时间点的距离长度-0h距离=每个时间长度细胞整体迁移的距离,求出均数和标准差,时间为横轴,迁移距离为纵轴(mm)作图,并比较初始0h与实验结束时试验组与对照组的照片。

 


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